前言：实时无标记动态细胞分析技术（RTCA，Real Time Cellular Analysis）可以检测贴壁细胞的电极阻抗，从而获得细胞变化的参数，包括细胞生长、伸展、形态变化、死亡和贴壁等。人乳腺癌细胞MDA-MB-468为贴壁细胞，先接种癌细胞，待细胞到达对数期，添加NK细胞，监测癌细胞的信号变化，从而获得NK细胞对癌细胞的杀伤效果。
实验目的
监测NK细胞对实体瘤细胞的杀伤效果。
实验材料
细胞及试剂
关键仪器设备
实验步骤
细胞准备
人乳腺癌细胞MDA-MB-468培养一代后，收获计数，按照每孔10000个接种至RTCA检测耗材中，共接种10孔。
冻存的NK细胞（保存于-80℃，一周），37℃水浴复苏，检测数量与纯度备用。
NK细胞杀伤
接种人乳腺癌细胞MDA-MB-468后，观察细胞生长曲线，待曲线明显升高时，分别接种不同效靶比的NK细胞，继续监测。接种数量及效靶比如下：
实验结果
NK细胞复苏流式结果
RTCA cell index分析细胞杀伤
接种人乳腺癌细胞MDA-MB-468后，25h左右Cell Index曲线斜率相当，说明细胞在稳步增殖状态，此时开始添加NK细胞，效靶比分别为1：1、4：1、8：1、16：1，对照组添加等量培养基，每孔有2个平行对照。
可以看到，对照组癌细胞继续稳步增殖，于90h左右到达平台期；效靶比1：1、4：1杀伤后癌细胞仍可增殖，杀伤效果不佳；效靶比为16：1时，癌细胞几乎全部被杀死，将近70h+细胞无任何增殖。
细胞杀伤后的图像对比
人乳腺癌细胞MDA-MB-468为贴壁生长，NK细胞悬浮或半贴壁生长，镜下易成团，且NK细胞体积比癌细胞小。
通过镜下观察图像可以看到，效靶比1：1组可看到细胞比较满，效靶比4：1组细胞呈斑块状，一些区域完全没有细胞。效靶比8：1组细胞细胞更少一些，只有少数区域长了细胞，大部分区域没有细胞生长；而效靶比16：1组几乎找不到癌细胞生长，可看到NK细胞结团。
实验结论
NK细胞冻存复苏后仍有很高的活率（98.8%）及很高的纯度（95.3%）
通过RTCA实时无标记细胞分析技术，冻存复苏NK细胞在效靶比为16：1时，对人乳腺癌细胞MDA-MB-468起到了非常好的杀伤效果。
相比于新鲜NK细胞的杀伤效果（效靶比4：1时细胞全部杀伤），冻存NK细胞的杀伤能力大幅降低。
